鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）
“鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）”由南京天邦生物科技有限公司、国家兽用生物制品工程技术研究中心和江苏省农业科学院兽医研究所根据市场需求共同研制，于年取得国家三类新兽药注册证书“证号：（）新兽药证字42号”。
鸡新城疫活疫苗、传染性支气管炎活疫苗是现代养禽业疫病防治使用最普遍的一种疫苗，国内普通禽类活疫苗通常使用牛奶、蔗糖（或明胶蔗糖）作为冻干保护剂，产品一般要求在-15℃以下条件保存，2～8℃保存时间普遍较短。在实际的生产应用中，疫苗的贮藏、运输、使用等环节很难满足规定的冷链的要求，尤其在气温较高的夏秋季节，疫苗的运输短则1~2日，多则5～7日，经常出现因上述原因引起疫苗效力下降、甚至失效。而国外厂家生产的冻干活疫苗普遍采用耐热冻干保护剂，其产品2～8℃保存期在24个月左右。为解决决传统冻干活疫苗对贮藏、运输等冷链要求较高的问题，使冻干疫苗2～8℃条件下，保存期达到24个月左右，我们研制出新型耐热保护剂活疫苗。鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）的研制通过实验室研究、中间试制及临床试验，取得了满意效果。产品2～8℃保存期和37℃耐老化试验均达到了进口同类产品的质量水平。
1关于*种来源及标准制定依据
1.1*种及来源
制造本品用的*种为鸡新城疫病*弱*LaSota株，鸡传染性支气管炎病*弱*H52株；效检用强*为鸡新城疫病*北京株，中和试验标准*为鸡传染性支气管炎病*MN株。以上*株均从中国兽医药品监察所引进，经SPF鸡胚复壮、扩繁、鉴定，建立生产及检验用种*种子批。
1.2.2鸡传染性支气管炎病*H52株
本研究中把从中国兽药监察所申购的鸡传染性支气管炎病*H52株*种通过SPF鸡胚传代、扩繁至E11代，并对*种进行有关鉴定。鉴定结果表明，E2～E11代*种的纯净性、病*含量、安全性、免疫原性、特异性等均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》（二OOO年版）中有关鸡传染性支气管炎病*H52株的*种标准。表明引进的鸡传染性支气管炎病*H52株传代稳定、具有良好的安全性和免疫原性，可以作为疫苗研制和生产用*种。
1.2.3鸡新城疫病*效检用强*北京株
本研究用从中国兽医药品监察所引进的鸡新城疫病*强*北京株冻干*，经SPF鸡胚复壮和传代后进行鉴定。结果表明：*种纯净、对鸡最小致死量和对鸡胚的半数致死量均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》（二OOO年版）中有关鸡新城疫疫苗效检用强*标准。
1.2.4鸡传染性支气管炎中和抗体测定标准*MN株
本研究用从中国兽医药品监察所引进的鸡传染性支气管炎病*MN株进行复壮，并进行鉴定。结果显示，复壮后的MN株强*对鸡胚的*力不低于.5EID50/0.1ml，并且可以被抗鸡传染性支气管炎病*特异性血清中和，达到了《中华人民共和国兽用生物制品规程》（二OOO年版）中有关效检用鸡传染性支气管炎病*MN株的*种标准，可以作为中和试验用*种。
2疫苗制造及半成品检验
2.1生产用*种制备、制苗材料的选择、制苗用*液的制备、半成品检验等均按照“鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗制造及检验规程（草案）”进行，与《中华人民共和国兽用生物制品规程》（二OOO年版）中“鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗制造及检验规程”相一致。
2.2配苗及分装将检验合格的鸡新城疫病*LaSota株鸡胚液与鸡传染性支气管炎病*H52株鸡胚液，按适当比例，滤过混合于同一容器内，加入一定比例的耐热保护剂，同时加适量抗生素，充分摇匀，定量分装，每羽份病*含量：鸡新城疫病*LaSota株不低于.0EID50，鸡传染性支气管炎病*H52株不低于.5EID50。
3关于成品质量的标准
3.1成品常规检验物理性状检验、无菌检验、支原体检验、外源病*检验、真空度测定、剩余水分测定均按现行《中国兽药典》方法和标准。鉴别检验、安全检验和效力检验均按现行《中国兽药典》中“鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）质量标准”进行。三批实验室产品各项检验均符合质量标准的规定。
3.2安全检验鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）三批实验室制品通过滴鼻点眼、饮水途径对21日龄SPF鸡进行一次单剂量接种、单剂量重复接种、一次超剂量接种的安全性试验，结果各组试验鸡精神良好，饮食、呼吸正常，未见异常临床反应，剖检未观察到任何鸡新城疫或者传染性支气管炎的特异性病变及其它炎症反应。因此，3批实验室试制品对鸡均是安全的。
3.3效力检验三批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）实验室产品、普通新支二联活疫苗（LaSota株+H52株）、鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）及鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H52株）均按照现行质量标准，分别用鸡胚和鸡进行效力比较试验。结果，鸡新城疫的病*含量均大于.0EID50/羽份，鸡传染性支气管炎的病*含量均大于.5EID50/羽份；免疫后，用鸡新城疫病*强*北京株攻*，对照鸡全部（3/3）发病死亡，免疫鸡9/10获得保护；用鸡传染性支气管炎病*强*MN株进行中和试验，免疫鸡中和抗体效价在均在1∶8以上。
3.4免疫期试验三批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）实验室制品、某厂家普通二联活疫苗（LaSota株+H52株）、鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）及鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H52株）分别以滴鼻点眼、饮水途径接种21日龄SPF鸡，并于免疫后5、7、14、21、30、45、60、75日检测血清中的鸡新城疫、传染性支气管炎HI抗体，同时在免疫后5、7、60、75日进行鸡新城疫攻*保护试验和传染性支气管炎中和抗体测定。结果，免疫后7日，血清中的新城疫HI抗体达到4.0log2以上，攻*保护率为90%，传染性支气管炎HI抗体达到3.3log2以上，90%的中和抗体效价在1∶8以上；免疫后21～30日，新城疫HI抗体达到高峰，为7.0～7.3log2；免疫后30～45日，传染性支气管炎HI抗体达到高峰，为5.0～5.3log2；免疫后60日，新城疫HI抗体下降至4.5～4.9log2，但攻*保护率仍在90%以上；免疫后75日，传染性支气管炎HI抗体下降至4.5～4.8log2，但中和抗体效价%在1∶8以上。结果表明，新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）抗体产生期与免疫期与普通二联活疫苗（LaSota株+H52株）一致，达到鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）及鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H52株）的水平，因而我们将该疫苗的免疫期暂定为2个月。
3.5保存期确定三批鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗（LaSota株+H52株）实验室制品、某厂家普通二联活疫苗（LaSota株+H52株）、鸡新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株）及鸡传染性支气管炎耐热保护剂活疫苗（H52株）置2～8℃条件下保存，分别于3、6、9、12、18、24、27个月后取出，进行疫苗性状、水分含量、病*含量测定。结果，三批制品的性状检验合格，水分含量均不大于4%，每羽份鸡新城疫抗原含量均在.0EID50以上，传染性支气管炎抗原含量均在.5EID50以上。在24、27个月时分别将疫苗取出，用25ml灭菌生理盐水稀释后，置2～8℃、25℃4个小时，新城疫抗原含量均不小于.0EID50/羽份，传染性支气管炎抗原含量均不小于.5EID50/羽份，分别用鸡进行效力检验均合格。因此，该疫苗在2～8℃条件下的保存期可达到27个月，与新城疫耐热单苗、传染性支气管炎耐热单苗相一致，明显优于普通二联苗。但，为了充分保证疫苗在运输、保存中的有效性，我们将疫苗在2～8℃条件下的保存期定为24个月。
3.6疫苗37℃耐老化试验标准的制定加速稳定性试验显示，疫苗在37℃放置10日后，鸡新城疫病*LaSota株的下降滴度为1.0～0.83；鸡传染性支气管炎病*H52株的下降滴度为1.0～0.79。因此，我们将疫苗的37℃耐老化试验标准定为，疫苗在37℃条件下，保存10天，每羽份鸡新城疫和传染性支气管炎病*含量下降均不超过1个滴度，判为合格。
4鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热活疫苗（LaSota株+H52株）的正确应用
4.1适用于21日龄以上鸡。按瓶签注明羽份，用灭菌生理盐水或适宜的稀释液稀释。滴鼻免疫，每只鸡滴鼻1滴（0.03ml）；饮水免疫，剂量加倍，其饮水量根据日龄大小而定，一般20~30日龄每只10～20ml，成鸡每只20～30ml。
4.2疫苗稀释后，应放冷暗处，必须在4小时内用完。
4.3饮水免疫时，忌用金属容器，饮用前至少停水2-4个小时。